膠體金(colloidal gold),又稱金溶膠(gold solution),是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠,屬于多相不均勻體系,顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標記物用于免疫組織化學,近10多年來膠體金標記已經發(fā)展為一項重要的免疫標記技術。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學等許多領域的研究已經得到發(fā)展,并越來越受到相關研究領域的重視。
膠體金的應用:
1、膠體金在電鏡水平的應用。膠體金應用電鏡水平的研究最早,發(fā)展最快,應用最廣泛。其最大優(yōu)點是可以通過應用不同大小的顆粒或結合酶標進行雙重或多重標記。直徑為3~15nm 膠體金均可用作電鏡水平的標記物。3~15nm 的膠體金多用于單一抗原顆粒的檢測,而直徑15nm 多用于檢測量較多的感染細胞。
膠體金用于電鏡水平的研究,主要包括:①細胞懸液或單層培養(yǎng)中細胞表面抗原的觀察。②單層培養(yǎng)中細胞內抗原的檢測。③組織抗原的檢測。金標記在電鏡水平的應用,主要方法包括:包埋前染色、包埋后染色、免疫負染色、雙標記技術和原位雜交技術等。實驗證明,該法樣本用量少、檢測速度快、對比明顯、操作簡單、敏感性和特異性高,既可用于抗原檢測,也可用于抗體檢測,因此,可同時適用于科研和診斷。
2、膠體金在光鏡水平的應用。膠體金同樣可用做光鏡水平的標記物,取代傳統(tǒng)的熒光素、酶等。各種細胞涂片、切片均可應用。主要用于:①用單克窿抗體或抗血清檢測細胞懸液或培養(yǎng)的單層細胞的膜表面抗原。②檢測培養(yǎng)的單層細胞胞內抗原,③組織中或亞薄切片中抗原的檢測。 膠體金用于光鏡水平的研究,可以彌補其它標記物不可避免的本底過高和內部酶活性干擾等缺點。
3、膠體金在流式細胞儀中的應用。應用熒光素標記的抗體,通過流式細胞儀計數分析細胞表面抗原,是免疫學研究中的重要技術之一。但由于不同熒光素的光譜相互重疊,區(qū)分不同的標記困難,因此必須尋找一種非熒光素標記物,用于流式細胞計數。這樣可以同時進行幾種標記。該標記物必須能夠改變散射角,膠體金可以明顯地改變紅激光散射角,因而可以作為流式細胞儀的標記物之一。
4、凝集試驗:單分散的免疫金溶膠呈清澈透明的溶液,其顏色隨溶膠顆粒大小而變化,當與相應抗原或抗體發(fā)生專一性反應后出現凝聚,溶膠顆粒極度增大,光散射隨之發(fā)生變化,顆粒也會沉降,溶液的顏色變淡甚至變成無色,這一原理可定性或定量地應用于免疫反應。
5、免疫印跡技術(immunoblotting):免疫印跡是一種較新的免疫化學技術。用聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質分離,得到的區(qū)帶轉移至硝酸纖維素膜,然后用酶免疫法(或免疫熒光、RIA)進行定量。免疫膠體金也可用于該法的定量。轉移后的硝酸纖維素膜與某特異性的抗體保溫后,再與經葡萄球菌A蛋白致敏的膠體金溫育,徹底洗去多余的膠體金,根據膜上膠體金顆粒顏色深淺可測知樣品中的特異性抗原。
利用金顆??纱呋y離子還原成金屬銀這一原理,采用銀顯影劑增強金顆粒的可見性,更可大大提高測定靈敏度,檢測下限可低至 0.1ng,這種免疫金銀染色法應用已日趨廣泛。由于膠體金免疫印跡技術簡便、快速,且有相當的高的靈敏度,在臨床免疫診斷上有很大的應用潛力。
6、膠體金在肉眼水平的應用。膠體金取代傳統(tǒng)三大標記物,用于肉眼水平的免疫檢測中。除了膠體金本身具有的特點外,還有以下優(yōu)點:①試劑和樣本用量極小,樣本量可低至1~2ul;②不需γ-計數器、熒光顯微鏡、酶標檢測儀等貴重儀器,更適于現場應用; ③沒有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質參與;④實驗結果可以長期保存;⑤時間大大縮短,提高了檢測速度。金標過程中,無共價鍵形成,是一定離子濃度下的物理吸附。因此幾乎所有的大分子物質都可被金標記,標記后大分子物質活性不發(fā)生改變。實驗結果表明,膠體金的敏感性可達到 ELISA的水平。而結合銀染色時,檢測的敏感性更大大提高。
深芬儀器膠體金快速分析儀介紹:
CSY-JA
膠體金快速檢測儀應用膠體金免疫層析技術的原理,通過反射光譜法測試CT線強弱程度可以檢測生化卡、金標卡及液態(tài)滴定模塊制成的獸藥殘留、瘦肉精、抗生素殘留、動物疫病、重金屬、農藥殘留、色素、轉基因、動物疫病、水質安全等項目。
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